Прямые методы учета микроорганизмов

При прямом микроскопировании воды количество обнаруживаемых микроорганизмов оказывается небольшим. Поэтому для изучения морфологического разнообразия и оценок их общего числа в единице объема можно провести концентрацию пробы. Для этого используют мембранные фильтры с размерами пор 0,35;0,5;0,23;0,3;0,40 мкм. Перед использованием их кипятят в течение 20-30 минут в дистиллированной воде в закрытом сосуде, в котором их и сохраняют.

Для фильтрации воды используют фильтры Зейтца или иной конструкции. Фильтрацию осуществляют под вакуумом. Перед фильтрацией в воду добавляют акридин-оранж (0,4%) из расчета 0,01% в 0,02 м трисбуфере и выдерживают 3 минуты до полного окрашивания. Объем фильтруемой воды может быть от 10 до 20 мл в зависимости от типа водоема. Мембранный фильтр извлекают из фильтрующего аппарата и подсушивают на фильтровальной бумаге под стеклянным колпаком. После этого помещают на каплю иммерсионного масла на предметном стекле. Вторую каплю масла наносят сверху и прикрывают покровным стеклом. Препарат рассматривают в люминесцентном микроскопе.

При использовании МБР или других люминесцентных микроскопов процедура подготовки пробы для счета иная. После отфильтровывания неокрашенной пробы фильтр подсушивают на фильтровальной бумаге на воздухе. Высушенные фильтры окрашивают карболовым эритрозином (5% эритрозин в 5% карболовой кислоты в 100 г воды) в течение 4-24 часов. Для этого в чашку Петри помещают кружок фильтровальной бумаги и увлажняют краской. На нее нижней строной кладут фильтры и закрывают крышкой. После окрашивания фильтры отмывают, перекладывая их на влажную фильтровальную бумагу до тех пор, пока фильтр будет оставлять на бумаге лишь розового цвета. При этом площадь фильтра должна быть розовой, а края бесцветными. Затем фильтр высушивают при комнатной температуре.

Для подсчета численности микроорганизмов фильтр переносят на предметное стекло в каплю иммерсионного масла (можно использовать 1/4 или 1/2 фильтра). Сверху наносят еще каплю масла и микроскопируют с перемещением сетчатого микрометра. Подсчет ведут в 20 полях зрения. Следует избегать подсчитывать микроорганизмы в близко расположенных полях зрения. В каждом поле зрения должно быть не менее 50 микробов, иначе число полей зрения необходимо увеличить.

Расчет численности бактерий проводится по формуле:

N=Kn/V

где S - число бактерий в 1 мл воды;

K=S/S1

где S - площадь фильтра, мкм2, S1 - площадь, на которой просчитываются клетки, мкм2; n - среднее число бактерий в одном поле зрения; V - объем профильтрованной воды, мл.

Для определения биомассы бактерий необходимо провести измерение размеров клеток. Промеры используются для расчетов объемов клеток, которые приравниваются к подобным геометрическим фигурам (шар, цилиндр, эллипсоид). Для определения среднего размера клеток делают примеры 10 клеток каждой размерной группы (крупные, средние, мелкие). Для поправки на "усыхание" полученный объем умножают на 1,6.

Немного больше об экологии

Охрана почв
Земля всегда занимала главенствующее место среди национальных богатств любого государства. Ниже в таблице приведены данные о почвенных ресурсах планеты, о распространении различных типов почв. Здесь же приведены данные и об их хозяйственном освоении. В зависимости ...

Микробиологические методы исследования водоемов
Микроорганизмы, обитающие в водной толще, осуществляют процессы минерализации органических веществ, а также взаимопревращения соединений азота, фосфора, железа, марганца и др. Пробы для микробиологических анализов берут в тех точках и в те же сроки, которые намеч ...